方法步驟
接種操作方法
斜面接種(接金黃葡萄球菌)
(1)操作前,先用75%酒精擦手,待酒精揮發(fā)后點燃酒精燈。 (2)將菌種管和斜面握在左手大拇指和其它四指之間,使斜面和有菌種的一面向上,并處于水平位置。
(3)先將菌種和斜面的棉塞旋轉一下,以便接種時便于拔出。
(4)左手拿接種環(huán)(如握鋼筆一樣),以火焰上先將環(huán)端燒紅滅菌,然后將有可能伸入試管其余部位也過火滅菌。 (5)用右手的無名指、小指和手掌將菌種管和待接斜面試管的棉花塞或試管帽同時拔出,然后讓試管口緩緩過火滅菌(切勿燒過燙)。 (6)將灼燒過的接種環(huán)伸入菌種管內,接種環(huán)在試管內壁或未長菌苔的培養(yǎng)基上接觸一下,讓其充分冷卻,然后輕輕刮取少許菌苔,再從菌種管內抽出接種環(huán)。 (7)迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入另一支待接斜面試管。從斜面底部向上作“Z”形來回密集劃線。有時也可用接種針僅在培養(yǎng)基的中央拉一條線來作斜面接種,以便觀察菌種的生長特點。
(8)接種完畢后抽出接種環(huán)灼燒管口,塞上棉塞。
(9)將接種環(huán)燒紅滅菌。放下接種環(huán),再將棉花塞旋緊。
液體接種
(1)由斜面培養(yǎng)基接入液體培養(yǎng)基,此法用于觀察細菌的生長特性和生化反應的測定,操作方法與前相同,但使試管口向上斜,以免培養(yǎng)液流出接入菌體后,使接種環(huán)和管內壁摩擦幾下以利洗下環(huán)上菌體。接種后塞好棉塞將試管在手掌中輕輕敲打,使菌體充分分散。 (2)由液體培養(yǎng)基接種液體培養(yǎng)基,菌種是液體時,接處除用接種環(huán)外尚用無菌吸管或滴管。接種時只需在火焰旁拔出棉塞,將管口通過火焰,用無菌吸管吸取菌液注入培養(yǎng)液內,搖勻即可。 平板接種
將菌在平板上劃線和涂布。
(1)劃線接種 見分離劃線法。
(2)涂布接種 用無菌吸管吸取菌液注入平板后,用滅菌的玻棒在平板表面作均勻涂布。 穿刺接種
把菌種接種到固體深層培養(yǎng)基中,此法用于嫌氣性細菌接種或為鑒定細菌時觀察生理性能用。
(1)操作方法與上述相同,但所用的接種針應挺直。
(2)將接種針自培養(yǎng)基中心刺入,直刺到接近管底,但勿穿透,然后尚原穿刺途徑慢慢拔出。
分離操作方法
稀釋分離法
通過不斷稀釋使被分離的樣品分散到最低限度,然后吸取一定量注入平板與溫度適合溶化了的瓊脂培養(yǎng)基混合,這樣分散的細菌被固定在原處而形成單菌落。
(1)將大腸桿菌或酵母菌用無菌水制作菌懸液。
(2)取若干支無菌試管,每支內盛9ml無菌水。
(3)吸取1ml制備好的菌懸液,置于第一支含有9ml無菌水的試管內,這樣就稀釋了10倍,也就是10-2。
(4)從第一支試管內(10-2)吸取1ml注入第二支含有無菌水的試管內,這樣就稀釋了100倍,也就是10-2。
(5)用同樣方法操作,直至稀釋至10-5-10-6。
(6)分別精確吸取10-5-10-6各稀釋度菌液0.2ml加入編好號的空無菌平皿中,同一稀釋度重復做三個平皿。
(7)將已溶化并冷卻至45℃的瓊脂培養(yǎng)基倒入上述各平皿內,輕輕旋轉使培養(yǎng)基與菌懸液充分混勻,凝固后倒置于37℃或38℃度恒溫箱中培養(yǎng)24-48小時,觀察平板上菌落生長和分布情況。 平板劃線分離法是接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線而達到分離微生物的一種方法。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離目的。
(1)倒平板 溶化牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基倒平板,水平靜置待凝。
(2)在酒精燈光焰上灼燒接種環(huán),待冷,取一接種環(huán)金黃葡萄球菌、大腸桿菌混合菌液。
(3)左手握瓊脂平板稍抬起皿蓋,同時靠近火焰周圍,右手持接種環(huán)伸入皿內,在平板上一個區(qū)域作之形回劃線,劃線時例接種環(huán)與平板表面成30-40°角度輕輕接觸,以腕力在表面作輕快的滑動,勿使平板表面劃破或嵌進增基內。 (4)灼燒接種杯,以殺滅接種環(huán)上尚殘余的菌液,待冷卻后,再將接種環(huán)伸入皿內,在第一區(qū)域劃過線的地方稍接觸一下后,轉動90°,在第二區(qū)域繼續(xù)劃線。
(5)劃畢后再灼燒接種杯,冷卻后用同樣方法在其他區(qū)域劃線。
(6)全部劃線完畢后,在平皿底用特種蠟筆注明菌種、日期、組別、姓名。將整個培養(yǎng)皿倒置放入恒溫培養(yǎng)箱。
(7)37℃經(jīng)過24-48小時培養(yǎng)后取出觀察。注意菌落的開關、大小、顏色、邊緣、表面結構、透明度等性狀。