測(cè)定時(shí),除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照,采用1cm的石英吸收池,在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸光度,或由儀器在規(guī)定波長附近自動(dòng)掃描測(cè)定,以核對(duì)供試品的吸收峰波長位置是否正確,除另有規(guī)定外,吸收峰波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi),并以吸光度最大的波長作為測(cè)定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù),以在0.3~0.7之間為宜。儀器的狹縫波帶寬度宜小于供試品吸收帶的半寬度的十分之一,否則測(cè)得的吸光度會(huì)偏低;狹縫寬度的選擇,應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增大為準(zhǔn),由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,因此測(cè)定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù),或由儀器自動(dòng)扣除空白讀數(shù)后再計(jì)算含量。
當(dāng)溶液的pH值對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響時(shí),應(yīng)將供試品溶液的pH值和對(duì)照品溶液的pH值調(diào)成一致。
1.鑒別和檢查分別按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。
2.含量測(cè)定一般有以下幾種方法。
(1)對(duì)照品比較法
按各品種項(xiàng)下的方法,分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液,對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量的100%±10%,所用溶劑也應(yīng)完全一致,在規(guī)定的波長測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度后,按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度∶
(2)吸收系數(shù)法
按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液,在規(guī)定的波長處測(cè)定其吸光度,再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí),吸收系數(shù)通常應(yīng)大于100,并注意儀器的校正和檢定。
(3)計(jì)算分光光度法
計(jì)算分光光度法有多種,使用時(shí)應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸光度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí),波長的微小變化可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響,故對(duì)照品和供試品的測(cè)試條件應(yīng)盡可能一致。計(jì)算分光光度法一般不宜用作含量測(cè)定。 (4)比色法
供試品本身在紫外-可見光區(qū)沒有強(qiáng)吸收,或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度,可加入適當(dāng)?shù)?/span>顯色劑,使反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收移至可見光區(qū),這種測(cè)定方法稱為比色法。 用比色法測(cè)定時(shí),應(yīng)取數(shù)份梯度量的對(duì)照品溶液,用溶劑補(bǔ)充至同一體積,顯色后,以相應(yīng)試劑為空白,在各品種規(guī)定的波長處測(cè)定各份溶液的吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,再根據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得其相應(yīng)的濃度,并求出其含量。
也可取對(duì)照品溶液與供試品溶液同時(shí)操作,顯色后,以相應(yīng)的試劑為空白,在各品種規(guī)定的波長處測(cè)定對(duì)照品和供試品溶液的吸光度,按上述(1)法計(jì)算供試品溶液的濃度。
除另有規(guī)定外,比色法所用空白系指用同體積溶劑代替對(duì)照品或供試品溶液,然后依次加入等量的相應(yīng)試劑,并用同樣方法處理制得。