臺(tái)盼藍(lán)拒染法是利用臺(tái)盼藍(lán)只能將死細(xì)胞染成藍(lán)色而活細(xì)胞不能被染上的方法檢測(cè)細(xì)胞存活率的一種快速簡(jiǎn)便的方法。

簡(jiǎn)介

臺(tái)盼藍(lán)拒染法是利用臺(tái)盼藍(lán)只能將

染色原理

正常細(xì)胞具有完整的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，而死亡的細(xì)胞其細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)被破壞。臺(tái)盼藍(lán)無(wú)法通過(guò)正常的細(xì)胞膜因而正常的細(xì)胞不被臺(tái)盼藍(lán)染上，而死細(xì)胞則可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。

流程

（1）將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞濃度調(diào)整為1~10×10細(xì)胞/ml，按10~10個(gè)細(xì)胞接種于96孔板，每孔100 μl；

（2）培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)后，對(duì)其進(jìn)行不同處理，每個(gè)處理設(shè)三個(gè)平行對(duì)照；

（3）收集細(xì)胞，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色，在倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)藍(lán)染及不染色細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞存活率；

（4）結(jié)果統(tǒng)計(jì)：

鏡下觀察，死細(xì)胞被染成淡藍(lán)色，而活細(xì)胞拒染。

根據(jù)下式求細(xì)胞活力：

活細(xì)胞率（%）= 活細(xì)胞總數(shù)/（活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù)）×100

注意事項(xiàng)

臺(tái)盼藍(lán)染細(xì)胞時(shí)，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。否則，部分活細(xì)胞也會(huì)著色，會(huì)干擾計(jì)數(shù)。