食品微生物檢測(cè)（檢測(cè)方法）

簡(jiǎn)介

食品微生物檢驗(yàn)方法是食品質(zhì)量管理必不可少的重要組成部分，它是貫徹“預(yù)防為主”的方針，可以有效地防止或者減少食物人畜共患病的發(fā)生，保障人民的身體健康。食品微生物檢驗(yàn)是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是判定被檢食品是否食用的科學(xué)依據(jù)之一。通過(guò)食品微生物檢驗(yàn)，可以判斷食品加工環(huán)境及食品衛(wèi)生情況，能夠?qū)κ称繁患?xì)菌污染的程度作出正確的評(píng)價(jià)，為各項(xiàng)衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù)。

范圍

①生產(chǎn)環(huán)境的檢驗(yàn)：車(chē)間用水、空氣、地面、墻壁等。

②原輔料檢驗(yàn)：包括食用動(dòng)物、谷物、添加劑等一切原輔材料。

③食品加工、儲(chǔ)藏、銷(xiāo)售諸環(huán)節(jié)的檢驗(yàn)：包括食品從業(yè)人員的衛(wèi)生狀況檢驗(yàn)、加工工具、運(yùn)輸車(chē)輛、包裝材料的檢驗(yàn)等。

④食品的檢驗(yàn)：對(duì)出廠食品、可疑食品及食物中毒食品的檢驗(yàn)。

國(guó)內(nèi)外開(kāi)展微生物檢驗(yàn)的食品種類(lèi)較多，食品分類(lèi)方法也不盡相同。總的來(lái)看涉及微生物檢驗(yàn)的食品種類(lèi)主要有：奶制品、預(yù)烹煮食品、飲用水、蛋制品、水果、谷物、嬰幼兒食品、肉及肉制品、軟體動(dòng)物、禽肉、貝類(lèi)、白明膠、香草（藥）、即食食品、罐頭食品、調(diào)味品，粉類(lèi)制品、豆制品、冷凍飲品、糖果、海鮮、甜點(diǎn)、蔬菜、藻類(lèi)、食療食品、米面制品等。

我國(guó)開(kāi)展微生物檢驗(yàn)的重點(diǎn)食品種類(lèi)為：奶制品、罐頭食品、調(diào)味品、蛋制品、淀粉類(lèi)制品、發(fā)酵和非發(fā)酵性豆制品、冷凍飲品、糖果、飲用天然礦泉水等，其中食糖以及保健品的微生物檢驗(yàn)為我國(guó)所獨(dú)有。

指標(biāo)

目前，我國(guó)衛(wèi)生部頒布的食品微生物指標(biāo)有菌落總數(shù)、大腸菌群和致病菌3項(xiàng)。

菌落總數(shù)

菌落總數(shù)是指食品檢樣在嚴(yán)格規(guī)定的條件下（樣品處理、培養(yǎng)基及其pH值、培養(yǎng)溫度與時(shí)間、計(jì)數(shù)方法等）培養(yǎng)后，單位重量(g)、容積(mL)或表面積(cm)上，所生成的細(xì)菌菌落總數(shù)。

菌落總數(shù)

大腸菌群

腸桿菌科的埃希氏菌屬，檸檬酸桿菌屬，腸桿菌屬和克雷伯菌屬統(tǒng)稱(chēng)為大腸菌群。它們均來(lái)自人或溫血?jiǎng)游锬c道，不形成芽孢，在35－37℃條件下發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性桿菌。這些細(xì)菌是寄居于人及溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)的常居菌，它隨著大便排出體外。食品中如果大腸菌群數(shù)越多，說(shuō)明食品受糞便污染的程度越大。故以大腸菌群作為糞便污染食品的衛(wèi)生指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)食品的質(zhì)量，具有廣泛的意義。

大腸菌群

致病菌

致病菌即能夠引起人們發(fā)病的細(xì)菌。大腸菌群檢驗(yàn)呈陽(yáng)性，并懷疑食品可能受到致病菌污染時(shí)可進(jìn)行致病菌檢驗(yàn)。在我國(guó)現(xiàn)有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中，致病菌一般指“腸道致病菌和致病性球菌”，主要包括沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、致病性鏈球菌等四種，致病菌不允許在食品中檢出。

對(duì)不同的食品和不同的場(chǎng)合，應(yīng)選擇一定的參考菌群進(jìn)行檢驗(yàn)。如海產(chǎn)品以副溶血性弧菌作為參考菌群，蛋與蛋制品以沙門(mén)氏菌菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌等作為參考菌群，米、面類(lèi)食品以蠟樣芽孢桿菌、變形桿菌、霉菌等作為參考菌群，罐頭食品以耐熱性芽孢菌作為參考菌群等。

霉菌及其毒素

我國(guó)還沒(méi)有制定出霉菌的具體指標(biāo)，鑒于有很多霉菌能夠產(chǎn)生毒素，引起食物中毒及其他疾病，故應(yīng)該對(duì)產(chǎn)毒霉菌進(jìn)行檢驗(yàn)。如曲霉屬的黃曲霉、寄生曲霉等，青霉屬的橘青霉、島青霉等，鐮刀霉屬的串珠鐮刀霉、禾谷鐮刀霉等。

霉菌

其他指標(biāo)

微生物指標(biāo)還應(yīng)包括病毒，如肝炎病毒、豬瘟病毒、雞新城疫病毒、馬芷克氏病毒、口蹄疫病毒、狂犬病病毒，豬水泡病毒等；另外，從食品檢驗(yàn)的角度考慮，寄生蟲(chóng)也被很多學(xué)者列為微生物檢驗(yàn)的指標(biāo)，如旋毛蟲(chóng)、囊尾蚴、豬肉孢子蟲(chóng)、蛔蟲(chóng)、肺吸蟲(chóng)、弓形體、螨、姜片吸蟲(chóng)、中華分枝睪吸蟲(chóng)等。

美國(guó)開(kāi)展的食品微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目主要包括：需氧菌平板計(jì)數(shù)、糞大腸菌群、大腸埃希氏菌、凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、創(chuàng)傷弧菌、肉毒梭菌、麻痹性貝類(lèi)毒素、神經(jīng)性貝類(lèi)毒素、遺忘性貝類(lèi)毒素以及組胺等。

程序

（1）采集樣品

采樣前要了解所采樣品的來(lái)源、加工、儲(chǔ)藏、包裝、運(yùn)輸?shù)惹闆r，采樣時(shí)必須做到：使用的器械和容器需經(jīng)滅菌，嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作；不得加防腐劑；液體樣品應(yīng)攪拌均勻后才去采樣，固體樣品應(yīng)在不同部位采取以使樣品具代表性；取樣后及時(shí)送檢。

國(guó)際食品微生物標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(ICMSF)制定的食品微生物學(xué)分析采樣方法，目前已在國(guó)內(nèi)外被逐步推廣采用。ICMSF根據(jù)以下原則來(lái)規(guī)定不同的采樣數(shù)：①各種微生物本身對(duì)人的危害程度各有不同；②食品經(jīng)不同條件處理后，其危害程度可分為3種情況：危害度降低；危害度未變；危害度增加。依據(jù)ICMSF采樣方法規(guī)定，其中：n：指一批產(chǎn)品采樣個(gè)數(shù)；c：指該批產(chǎn)品中檢樣菌數(shù)超過(guò)限量的檢樣數(shù)；m：指合格菌數(shù)限量；M：指附加條件后判定為合格的菌數(shù)限量。

（2）樣品送檢

采集好的樣品應(yīng)及時(shí)送到食品微生物檢驗(yàn)室，一般不應(yīng)超過(guò)3h，如果路程較遠(yuǎn)，可將不需冷凍的樣品保持在1～5℃的環(huán)境中，勿使凍結(jié)，以免細(xì)菌遭受破壞。

樣品送檢時(shí)，必須認(rèn)真填寫(xiě)申請(qǐng)單，以供檢驗(yàn)人員參考。

檢驗(yàn)人員接到送檢單后，應(yīng)立即登記，填寫(xiě)序號(hào)，并按檢驗(yàn)要求，立即將樣品放在冰箱或冰盒中，并積極準(zhǔn)備條件進(jìn)行檢驗(yàn)。

（3）樣品處理

樣品處理應(yīng)在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行，若是冷凍樣品必須事先在原容器中解凍，解凍溫度為2～5℃不超過(guò)18h或45℃不超過(guò)15min。

a.固體樣品

用無(wú)菌刀、剪或鑷子稱(chēng)取不同部位的樣品，剪碎放入滅菌容器內(nèi)，加一定量的水混勻，制成1: 10混懸液，進(jìn)行檢驗(yàn)。在處理蛋制品時(shí)，加入約30個(gè)玻璃球，以便震蕩均勻。生肉及內(nèi)臟，先進(jìn)行表面消毒，再剪去表面樣品，采集深層樣品。

b.液體樣品

原包裝樣品用點(diǎn)燃的酒精棉球消毒瓶口，再用經(jīng)石炭酸或來(lái)蘇兒消毒液消過(guò)毒的紗布將瓶口蓋住，用經(jīng)火焰消毒的開(kāi)關(guān)器開(kāi)啟。搖勻后用無(wú)菌吸管吸??；含有二氧化碳的液體食品，按上述方法開(kāi)啟瓶蓋后，將樣品倒入無(wú)菌磨口瓶中，蓋上消毒紗布，將蓋開(kāi)一小縫，輕輕搖動(dòng)，使氣體逸出后進(jìn)行檢驗(yàn)；將冷凍食品放入無(wú)菌容器內(nèi)，融化后檢驗(yàn)。

c.罐頭

罐頭

（4）檢驗(yàn)

每種指標(biāo)都有一種或幾種檢驗(yàn)方法，可根據(jù)不同的食品、不同目的來(lái)選擇恰當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)方法。通常所用的常規(guī)檢驗(yàn)方法為現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，（如FAO標(biāo)準(zhǔn)、WHO標(biāo)準(zhǔn)等），或食品進(jìn)口國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)（如美國(guó)FDA標(biāo)準(zhǔn)、日本厚生省標(biāo)準(zhǔn)、歐共體標(biāo)準(zhǔn)等）。

食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)室接到檢驗(yàn)申請(qǐng)單，應(yīng)立即登記，填寫(xiě)試驗(yàn)序號(hào)，并按檢驗(yàn)要求立即將樣品放在冰箱或冰盒中，積極準(zhǔn)備條件進(jìn)行檢驗(yàn)。

一般陽(yáng)性樣品發(fā)出后3d（特殊情況可適當(dāng)延長(zhǎng)）方能處理樣品；進(jìn)口食品的陽(yáng)性樣品，需保存6個(gè)月方能處理。陰性樣品可及時(shí)處理。

（5）結(jié)果報(bào)告

樣品檢驗(yàn)完畢后，檢驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)填寫(xiě)報(bào)告單，簽名后送主管人核實(shí)簽字，加蓋單位印章，以示生效，并立即交給食品衛(wèi)生監(jiān)督人員處理。