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斐林試劑
檢驗還原性糖的試劑
基本信息
| 中文名 | 斐林試劑 |
| 外文名 | Fehling's solution |
| 外觀 | 深藍色溶液 |
| 發(fā)明者 | |
| 作用 | 鑒定可溶性的還原性糖的存在 |
| 發(fā)明時間 | 1849年 |
| 原料 | 氫氧化鈉溶液、硫酸銅溶液、酒石酸鉀鈉 |
收起
定義
斐林試劑
配制方法
配制方法：0.1 g/mI NaOH(甲液)和0.05 g/mI CuSO(乙液)。甲液配制方法是將125 g氫氧化鈉和137 g酒石酸鉀鈉溶于500 mI，蒸餾水中(貯于帶橡皮塞的瓶中)。乙液配制方法是將34.5 g結晶硫酸銅溶于500 ml水中，加0.5 mI硫酸?；旌暇鶆颉?/span>
斐林試劑的使用方法：一般將斐林試劑甲液和乙液等體積混合(或在2 mL甲液中滴4～5滴乙液)，再將混合后的斐林試劑倒入待測液，水浴加熱或直接加熱。如待測液中存在還原糖，則呈現磚紅色沉淀；如待測液中不存在還原糖，則仍然呈藍色。
還原糖實驗
區(qū)別
班氏試劑
斐林試劑和班氏試劑的使用方法及原理不盡相同。斐林試劑和班氏試劑都是檢驗還原性糖的試劑，二者的使用方法及原理、成分也有區(qū)別，下面就從這幾種試劑的使用原理、成分及使用方法等方面做一簡單總結。
（1）班氏試劑常用于尿糖的鑒定，其配方與斐林試劑不一樣，其配方為：
②50mL加熱的水中加入8.5g無水硫酸銅。制成溶液；
③把CuSO溶液倒入檸檬酸鈉溶液中，邊加邊攪，如產生沉淀可濾去。
（2）其反應原理與斐林試劑略有差別。利用斐林試劑鑒定時，斐林試劑甲和斐林試劑乙直接反應生成酒石酸絡銅離子
酒石酸絡銅離子和可溶性還原糖在加熱條件下反應產生磚紅色沉淀。而班氏試劑中的產生卻是這樣的：檸檬酸鈉作為絡合劑，由碳酸鈉提供堿性。CuSO與檸檬酸鈉溶液和NaCO溶液混合時生成檸檬酸絡銅離子，檸檬酸絡銅離子與葡萄糖中的醛基反應生成磚紅色沉淀。
（3）兩種試劑的保存方式不同。斐林試劑甲和斐林試劑乙混合后會因酒石酸有一定的還原性而自發(fā)地緩慢產生氧化亞銅沉淀，因此斐林試劑一般為現用現配；而班氏試劑的配方中，檸檬酸鈉比較穩(wěn)定，實際堿性也不強，不易還原銅離子產生氧化亞銅沉淀，因此該試劑可長期保存。
當然，無論用班氏試劑還是斐林試劑，歸根結底都是二價銅與醛基在沸水浴加熱條件下反應而生成磚紅色的沉淀，兩者反應現象一樣，這就是二者的相同之處。
雙縮脲試劑
斐林試劑和雙縮脲試劑
斐林試劑和雙縮脲試劑都由NaOH溶液（斐林試劑中還有酒石酸鉀鈉）和CuSO溶液組成，但二者有如下三點不同：
（1）溶液濃度不同
CuSO溶液稱為斐林試劑乙，其濃度為0.05 g/mL；
CuSO溶液（雙縮脲試劑B）的濃度為0.01 g/mL。
（2）使用原理不同
斐林試劑是新配制的溶液，它在加熱條件下與醛基反應，被還原成磚紅色的沉淀，可用于鑒定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時，溶液的顏色變化過程為：淺藍色→棕色→磚紅色（沉淀）。
鑒定生物組織中是否含有蛋白質時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發(fā)生的是雙縮脲反應。具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。蛋白質的肽鍵在堿性溶液中能與Cu 絡合成紫紅色的化合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。
（3）使用方法不同
斐林試劑使用時，先等體積混合甲、乙兩液，而后立即使用，反應需要加熱（有時不加熱也反應）；雙縮脲試劑使用時，先加入NaOH溶液（1mL），振蕩搖勻，造成堿性的反應環(huán)境，然后再加入3~4滴CuSO溶液，振蕩搖勻后觀察現象。
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