正文

HAT選擇法

即胸苷激酶基因選擇法,胸苷激酶(Thymidine Kinase,簡(jiǎn)稱TK)能催化胸苷(T)轉(zhuǎn)變成dTMP,進(jìn)而生成dTTP。TK選擇系統(tǒng)將含有tk+基因的表達(dá)載體導(dǎo)入tk-宿主細(xì)胞,再用含有次黃嘌呤(H),氨基喋呤(A)和胸苷(T)的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,其中A為葉酸類似物,可阻斷dATP,dGTP的合成,及dUMP到dTTP的轉(zhuǎn)化,但H可合成IMP,再由IMP合成dATP和dGTP,含有載體的tk+細(xì)胞能利用T合成dTTP,故可合成DNA使細(xì)胞存活,不含載體的tk-細(xì)胞不能利用T合成dTTP,無法合成DNA使細(xì)胞死亡。該系統(tǒng)中的tk+基因能報(bào)告載體的導(dǎo)入,稱報(bào)告基因,培養(yǎng)基中含有H,A和T,故將這種選擇方法稱做HAT選擇法。